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人的幽门螺杆菌IgG(HP IgG)酶联免疫阐发(ELISA)

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  • 更新日期:2011-04-27 15:13
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具体引见

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本试剂仅供研讨利用      目标:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相干液体样本中幽门螺杆菌IgG(HP IgG)含量。
尝试道理:
    本试剂盒使用双抗原夹心法测定标本中()程度。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中顺次参加(HP IgG),再与HRP标识表记标帜的抗原分离,构成抗原-抗体-酶标抗原复合物,颠末完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的感化下转化成终极的黄色。色彩的深浅和样品中的幽门螺杆菌IgG(HP IgG)呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),经由过程尺度曲线计较样品中人的幽门螺杆菌IgG(HP IgG)浓度。
试剂盒构成
试剂盒构成
      48孔设置
96孔设置
保留
说明书
1份
1份
 
封板膜
2片(48)
2片(96)
 
密封袋
1个
1个
 
酶标包被板
1×48
1×96
2-8保留金沙澳门官网下载
尺度品:90ng/L
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8保留
尺度品稀释液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8保留
酶标试剂
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保留
样品稀释液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保留
显色剂A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保留
显色剂B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保留
停止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8保留
稀释洗涤液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2-8保留
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1.血清:室温血液天然凝固10-20分钟,离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。认真搜集上清,保留过程中如呈现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应按照标本的要求挑选EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混淆10-20分钟后,离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。认真搜集上清,保留过程中如有沉淀构成,该当再次离心。
3.尿液:用无菌管搜集,离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。认真搜集上清,保留过程中如有沉淀构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实施。
4.细胞培养上清:检测排泄性的成份时,用无菌管搜集。离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。认真搜集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度到达100万/ml阁下。经由过程重复冻融,以使细胞毁坏并放出细胞内成份。离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。认真搜集上清。保留过程中如有沉淀构成,应再次离心。
5.构造标本:切割标本后,称取重量。参加一定量的PBS,PH7.4。用液氮疾速冷冻保留备用。标本熔化后仍旧连结2-8的温度。参加一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充实。离心20分钟阁下(2000-3000转/分)。认真搜集上清。分装后一份待检测,其他冷冻备用。
操纵步调
1.         尺度品的稀释与加样:在酶标包被板上设尺度品孔10孔,在第一、第二孔平分别加尺度品100μl,然后在第一、第二孔中加尺度品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl别离加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔别离加尺度品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl别离加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔平分别加尺度品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl别离加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔平分别加尺度品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔平分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔别离加尺度品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度别离为60 ng/L,40 ng/L ,20 ng/L,10 ng/L,5 ng/L)。
2.         加样:别离设空缺孔(空缺比较孔不加样品及酶标试剂,其他各步操纵不异)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终极稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,只管不触及孔壁,悄悄晃悠混匀。
3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.         配液:将30(48T的20倍)倍稀释洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.         洗涤:当心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,云云反复5次,拍干。
6.         加酶:每孔参加酶标试剂50μl,空缺孔除外。
7.         温育:操纵同3。
8.         洗涤:操纵同5。
9.         显色:每孔先参加显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,悄悄震动混匀,37℃避光显色15分钟.
10.     停止:每孔加停止液50μl,停止反响(此时蓝色立转黄色)。
11.     测定:以空缺空调zero,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加停止液后15分钟之内停止。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏情况中掏出应在室温均衡15-30分钟前方可利用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保留。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响成果。
3. 各步加样均应利用加样器,并常常校正其准确性,以制止实验偏差。一次加样工夫最好掌握在5分钟内,如标本数目多,推荐利用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做尺度曲线,最好做复孔。如标本中待测物资含量太高(样本OD值大于尺度品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释必然倍数(n倍)后再测定,计较时请最初乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性利用,以制止穿插净化。
6. 底物请避光保留。
7. 严厉根据说明书的操纵停止,实验成果断定必需以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各类废弃物都应按感染物处置。
9. 本试剂差别批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
js3311com金沙网站计较:
以尺度物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,   
在坐标纸上绘出尺度曲线,按照样品的OD     
值由尺度曲线查出响应的浓度;再乘以稀释      
倍数;或用尺度物的浓度与OD值计算出标      
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值      
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      
倍数,即为样品的实践浓度。                  
                                             
(此图仅供参考)
试剂盒机能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
 
检测范畴:                                              
3 ng/L -70 ng/L                                         
                            js3311com金沙网站
保留条件及有效期:41668.com网站
1.试剂盒保留:;2-8
2.有效期:6个月

 
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